蛹蟲草母種培養(yǎng)新技巧應(yīng)用

　　農(nóng)業(yè)中的種植技巧是農(nóng)也工作人員都會(huì)想去學(xué)好的一個(gè)方面，當(dāng)然了這得有人員的指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)的介紹等，以下是對(duì)于蛹蟲草母種培養(yǎng)基配方優(yōu)化上的一個(gè)介紹。

　　摘要：蛹蟲草母種培養(yǎng)基的研究已有一些報(bào)道,但所述培養(yǎng)基各有不同,產(chǎn)量與品質(zhì)也高低不一,這種情況嚴(yán)重影響其產(chǎn)業(yè)發(fā)展。在蛹蟲草的母種培養(yǎng)中,培養(yǎng)基的配方是否優(yōu)良,直接影響菌絲體的生長(zhǎng)。因此,對(duì)蛹蟲草母種培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化研究,篩選出適合蛹蟲草菌絲體生長(zhǎng)的最佳母種配方具有一定的理論與實(shí)際意義。

　　關(guān)鍵詞：蛹蟲草,種植養(yǎng)殖,農(nóng)業(yè)類論文

　　1 材料和方法

　　1.1 菌 種

　　蛹蟲草試管母種由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物教研室提供。

　　1.2 主要儀器

　　不銹鋼立式壓力蒸汽滅菌器,上海申安醫(yī)療器械廠生產(chǎn),型號(hào):LDZX-30FB;超凈工作臺(tái),蘇凈集團(tuán)安泰公司制造,型號(hào):SW-CJIFD;恒溫培養(yǎng)振蕩器,天津市歐諾儀器儀表有限公司生產(chǎn),型號(hào):HNY-2102。

　　推薦期刊：《農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)》(月刊)是經(jīng)新聞出版總署2010年12月3日批準(zhǔn)，中國(guó)農(nóng)學(xué)會(huì)主辦的高水平學(xué)術(shù)性期刊。

　　1.3 培養(yǎng)基設(shè)計(jì)

　　根據(jù)蛹蟲草生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)條件及不同研究人員提供的最佳配方確定。

　　1.3.1 配方1 葡萄糖10 g、蛋白胨10 g、瓊脂20 g、MgSO4 0.3 g、KH2PO4 0.5g 、VB1(50 mg·L-1)、蒸餾水1 L、pH值5~6。

　　1.3.2 配方2 葡萄糖10 g、牛肉膏10 g、瓊脂25 g、MgSO4 0.6 g、KH2PO4 2 g、乙酸鈉5 g、檸檬酸二胺2 g、MnSO4 0.25 g、吐溫80 mL、酵母粉5 g或酵母膏10 g、蒸餾水1 L、pH值6.2~6.4。

　　1.3.3 配方3 蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、瓊脂17 g、NaCl 5 g、蒸餾水1 L、pH值7.2左右。

　　1.3.4 配方4 葡萄糖10 g、瓊脂20 g、MgSO4 1 g、KH2PO4 1.5 g、VB1(50 mg·L-1)、CaCO3 1 g、蒸餾水1 L、pH值5~6。

　　1.3.5 配方5 葡萄糖15 g、檸檬酸銨 2.5 g、瓊脂20 g、乙酸鈉5.5 g、MgSO4 0.65 g、MnSO4 0.3 g、KH2PO4 1.5 g、蒸餾水1 L、pH值自然。

　　1.3.6 配方6 20%馬鈴薯提取液中加入1%葡萄糖、1%蛋白胨、2%瓊脂、0.5%KH2PO4、0.3%MgSO4、VB1(10 mg·L-1)、蒸餾水1 L、pH值5.8。 1.4 方法步驟

　　1.4.1 培養(yǎng)基制備、分裝與滅菌 按培養(yǎng)基制備的常規(guī)技術(shù),分別制作以上6種配方培養(yǎng)基。配方中有馬鈴薯者,將馬鈴薯削皮、去掉芽眼切塊(0.5 cm×1 cm),稱質(zhì)量。置沸水中煮30 min,用4層紗布過(guò)濾擠壓取其汁液至于燒杯中,同時(shí)加入瓊脂及其它藥品攪拌使其充分溶解,加水定容至1 L,測(cè)定并調(diào)整酸堿度。將制備的培養(yǎng)基分別裝入試管中,裝量為管高的1/4。每種配方裝6支試管,塞上棉塞封口,捆扎。在壓強(qiáng)1.14×105 MPa、溫度120 ℃下高壓滅菌30 min后,待高壓鍋的氣壓降至0,將試管取出冷卻并擱置斜面,然后將其放入28~30 ℃室溫中培養(yǎng)48 h進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)。檢查完畢將其置于超凈工作臺(tái)中備用。

　　1.4.2 接種與培養(yǎng) 接種前將母種菌株擱置在恒溫箱中活化1 d,然后菌種移入接種室,在超凈工作臺(tái)中按無(wú)菌操作要求,向試管斜面中央接種,接種塊大小為5 mm×25 mm。注意接種塊不要碰到其它部位,以免影響菌種萌發(fā)后菌絲體的觀察。每種培養(yǎng)基配方接6支試管。接種后移入恒溫箱中培養(yǎng),培養(yǎng)條件為18.5~19 ℃,無(wú)光照。接種后每2 d記錄菌落形成及菌絲生長(zhǎng)情況。

　　1.4.3 測(cè)定菌絲長(zhǎng)速 菌絲長(zhǎng)速是菌絲生長(zhǎng)的指標(biāo)。將菌絲接種到斜面培養(yǎng)基中,每天測(cè)量1次菌落直徑,直至菌落滿管為止。觀察并記錄每種配方6支試管中菌絲的生長(zhǎng)情況,重復(fù)3次取其平均值。

　　1.4.4 統(tǒng)計(jì)滿管天數(shù) 滿管天數(shù)是菌種接種到斜面培養(yǎng)基上,到菌絲布滿斜面所需要的時(shí)間。觀察并記錄每種配方6支試管的滿管時(shí)間,重復(fù)3次取其平均值。

　　1.4.5 觀察菌種初萌發(fā)天數(shù) 從菌種接種到培養(yǎng)基上開(kāi)始觀察,到接種塊周圍長(zhǎng)出白色絨毛狀菌絲體,這段時(shí)間為菌種初萌發(fā)時(shí)間。從接種開(kāi)始,每24 h觀察并記錄每種配方6支試管中菌種的萌發(fā)情況,重復(fù)3次取其平均值。

　　1.4.6 觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì) 菌絲長(zhǎng)勢(shì)是評(píng)價(jià)菌絲生長(zhǎng)情況的重要指標(biāo)。以菌絲的潔白程度、生長(zhǎng)健壯程度、菌絲濃密程度、菌臺(tái)厚度為指標(biāo),觀察并記錄每種配方6支試管中菌絲的長(zhǎng)勢(shì)。觀察結(jié)果用很強(qiáng)、強(qiáng)、較強(qiáng)、弱4個(gè)等級(jí)表示。

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