清蒸大黃的炮制及其五種游離蒽醌的含量測定分析

　　摘要：采用ＨＰＬＣ法測定清蒸大黃中的５種游離蒽醌的含量。色譜柱為ＴｈｅｒｍｏＢＤＳＨＹＰＥＲＳＩＩＣ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇－０．１％磷酸（７６∶２４）水溶液為流動相，檢測波長為２５４ｎｍ，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱溫３０℃，進樣量１０μＬ。結(jié)果表明，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚分別在０．０２０７~０．４１４０μｇ（R２＝０．９９９９）、０．１７２１~３．４４２０μｇ（R２＝０．９９９６）、０．０２０３~０．４０６０μｇ（R２＝０．９９９９）、０．１４８０~２．９６００μｇ（R２＝０．９９９８）、０．１６４０~３．２８００μｇ（R２＝０．９９９３）的線性范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，說明該方法可作為大黃及其不同炮制品的質(zhì)量控制方法。

　　關(guān)鍵詞：清蒸大黃；游離蒽醌；炮制；高效液相色譜法

　　大黃屬中藥瀉下藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草均有收載。大黃為蓼科植物掌葉大黃（RｈｅｕｍｐａｌｍａｔｕｍＬ．）、唐古特大黃（RｈｅｕｍｔａｎｇｕｔｉｃｕｍMａｘˉｉｍ．ｅｘＢａｌ?．）或藥用大黃（Rｈｅｕｍｏ??ｉｃｉｎａｌｅＢａｉll．）的干燥根和根莖［１］。掌葉大黃和唐古特大黃被稱為北大黃，主產(chǎn)于青海和甘肅等地；藥用大黃稱為南大黃，主產(chǎn)于四川、陜西等地［２］。中國有大黃４５個品種和２個亞種，但２０１５版《中國藥典》只收錄３種大黃，即正品大黃、唐古特大黃和藥用大黃的干燥根及根莖，主要有效成分有蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸大黃酚、大黃素甲醚、沒食子酸、番瀉苷類、鞣質(zhì)、大黃多糖和微量元素等［３，４］。大黃性苦、寒，歸脾、胃、大腸、心、肝經(jīng)，藥理作用廣泛，如瀉下、消炎、抗菌、抗病毒、利膽、止血、降血脂、降血壓等［５，６］。

　?。辈牧吓c方法

　　１．１儀器

　?。祝幔簦澹颍螅玻叮梗蹈咝б合嗌V儀，包括２４８９ＵV、四元泵、真空脫氣泵、自動進樣器、柱溫箱和Ｅｍｐｏwｅｒ３液相工作站；ＰＲＡＣＴＵM２２４－ＫＮＳＯＰ電子分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；ＨＷＳ－２６電熱恒溫水浴鍋（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）。

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　　甲醇，色譜純（美國Ｆｉｓｈｅｒ科學(xué)世界公司）；甲醇、乙醇，分析純（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；醋酸鎂（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；磷酸（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；超純水，其他試劑均為分析純。蘆薈大黃素（批號：１６０５２０）、大黃酸（批號：１７０２１９）、大黃素（批號：１７０２２４）、大黃酚（批號：１６０１２４）、大黃素甲醚（批號：１６０６０２），純度＞９８％，均購于上海融禾醫(yī)藥科技有限公司。

　?。步Y(jié)果與分析

　　２．１色譜條件按照“１．３．２”色譜條件，各組分分離度良好（圖２）。

　　２．２線性關(guān)系考察分別精密吸取大黃混合對照品溶液１、２、５、８、１２、１５、２０μＬ注入液相色譜儀，測定峰面積，分別以峰面積和進樣量（μｇ）為縱坐標和橫坐標，繪制標準曲線并計算回歸方程。精密吸取上述大黃混合對照品稀釋液進樣，測定其信號（以峰高計算）與噪聲比值，將S／Ｎ＝３時的濃度定為檢測限（LＯD），將S／Ｎ＝１０時的濃度定為定量限（LＯＱ）。各組分在各自的含量范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（表１）。

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　　試驗采用ＨＰＬＣ測定大黃游離蒽醌類成分，對其流動相進行了考察，發(fā)現(xiàn)流動相中加入不同種類的酸對５種游離蒽醌的分離有較大影響。本試驗采用甲醇－０．１％磷酸溶液、甲醇－０．２％磷酸溶液、甲醇－０．１％冰醋酸溶液、甲醇－０．２％冰醋酸溶液和甲醇－０．１％冰醋酸溶液等流動相進行比較，結(jié)果表明，甲醇－０．１％磷酸溶液（７６∶２４）作為流動相，５種游離蒽醌分離效果較好，與雜峰達到基線分離。

　?。常才谥破放c其對應(yīng)的藥理相關(guān)性分析

　　在蒸制的過程中，蒸氣加熱，溫度高，破壞了主要瀉下成分的結(jié)合型大黃酸，使其瀉下作用下降；而大黃素、大黃酚和大黃素甲醚含量的增加，抑制血小板凝集作用，降低血小板活性，凝集狀態(tài)得到改善，滲透壓趨于正常。因此，清蒸大黃相對于生大黃來說，活血祛瘀的功效更好。生大黃經(jīng)炮制后，其藥效發(fā)生了改變，治療范圍擴大［１３－１５］。同時，經(jīng)過蒸制，清蒸大黃對胃腸道刺激較生大黃有所下降。不同的中藥炮制方法產(chǎn)生不同的炮制品，其治療效果也會產(chǎn)生差異，所以臨床上要辨證施治。

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