酶聯(lián)免疫吸附分析及其在食品安全檢測中的應(yīng)用

　　摘要：酶聯(lián)免疫吸附分析法可對食品中的細(xì)菌、生物毒素、藥物材料及轉(zhuǎn)基因食品等方面進(jìn)行準(zhǔn)確檢測?；诖?，在實(shí)際應(yīng)用中，需從食品安全檢測需求及酶聯(lián)免疫吸附分析法操作要點(diǎn)等角度進(jìn)行綜合分析，在實(shí)現(xiàn)技術(shù)分析的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)食品安全檢測分析水平的提升。

　　關(guān)鍵詞：食品；安全監(jiān)測；酶聯(lián)免疫吸附

　　酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）是以酶標(biāo)記抗體技術(shù)為基礎(chǔ)，在實(shí)際應(yīng)用中，可通過酶標(biāo)抗體及待測標(biāo)本的未標(biāo)記抗原進(jìn)行檢驗(yàn)，并分離游離的已經(jīng)結(jié)合的標(biāo)記抗原進(jìn)行酶活性測定與分析，從而得到待測抗原的含量。ELISA具有選擇性好、靈敏度高、檢測結(jié)果比較準(zhǔn)確、實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及化學(xué)分析等領(lǐng)域中?；诖?，研究及分析ELISA在食品安全檢測中的應(yīng)用，對進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)食品安全檢驗(yàn)水平提升有積極作用[1]。

　　1酶聯(lián)免疫吸附的基本原理

　　ELISA是將抗原或抗體以不損壞免疫活性的條件，結(jié)合到固相載體的表面。在進(jìn)行測定的過程中，可根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對抗原、抗體的反應(yīng)過程、復(fù)合物等進(jìn)行檢測分析。在反應(yīng)過程中，固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析，洗滌處理后，去除反應(yīng)液中的其他物質(zhì)，在加入酶反應(yīng)底物后，底物可通過酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物，最后，采用定性或定量分析的方式，對有色產(chǎn)物量進(jìn)行檢驗(yàn)與分析[2]。ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，其基本應(yīng)用原理如圖1所示。ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，其可以采用直接法、間接法兩種方式進(jìn)行檢驗(yàn)分析。其中，直接法則是酶標(biāo)記抗體與待檢測樣本中固相抗原直接產(chǎn)生作用，并在加入底物后，出現(xiàn)顏色變化。間接法則是以已知抗原為基礎(chǔ)，吸附在固相載體上，與待檢測樣本中的抗體作用為主，加入酶標(biāo)記抗同種動(dòng)物抗體的免疫球蛋白，并加入酶底物，顯色。ELISA在實(shí)際應(yīng)用中，可通過直接、間接的方式進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，并結(jié)合最終的顯色，從而判定最終的檢驗(yàn)結(jié)果。

　　2ELISA操作的影響因素分析

　　ELISA的實(shí)際應(yīng)用中，需對ELISA測定結(jié)果的影響因素進(jìn)行分析。①抗原包液的質(zhì)量對ELISA的測定結(jié)果會(huì)產(chǎn)生直接的影響。將抗原固定在聚苯乙烯微量反應(yīng)板中，其效果對抗原-抗體反應(yīng)等會(huì)產(chǎn)生直接的影響。②非特異性反應(yīng)的干擾。在設(shè)置稀釋液空白、陽性及陰性參比血清的基礎(chǔ)上，需采用包埋、封閉等方式進(jìn)行預(yù)處理。如在抗原包液中加入牛血清白蛋白、明膠和吐溫-20等，從而達(dá)到減少非特異性反應(yīng)的目的。③高選擇性的單克隆抗體可代替多克隆抗體，這對提高ELISA特異性方面有積極作用。④在實(shí)際操作中，選擇表面積相對較大的固相載體，可提高ELISA的敏感性以及操作性。⑤酶合交聯(lián)劑對ELISA的操作會(huì)產(chǎn)生直接的影響。在利用免疫法或化學(xué)法的過程中，HRP與抗體的交聯(lián)可采用高碘酸鈉氧化法進(jìn)行處理，從而達(dá)到檢驗(yàn)與操作的目的。酶底物本身要求無色，在反應(yīng)后可出現(xiàn)顏色變化。大多HRP是以鄰苯二胺為酶底物，AKP則是以硝基苯磷酸鹽為ELISA檢驗(yàn)的酶底物[3]。

　　3酶聯(lián)免疫吸附在食品安全檢測中的應(yīng)用分析

　　3.1細(xì)菌檢測

　　沙門氏菌是食品安全檢測中的關(guān)鍵指標(biāo)，可采用制備單克隆抗體的ELISA方法對沙門氏菌進(jìn)行檢測，最低檢測量可達(dá)到500cfu/g，時(shí)間為22h，可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)檢測。在利用BADot-ELISA對食品中的李氏桿菌進(jìn)行檢驗(yàn)的過程中，其檢驗(yàn)的敏感性可達(dá)到104個(gè)/mL，而且節(jié)省時(shí)間。以蘇丹紅1號(hào)為研究對象，在對其抗原序列進(jìn)行分析時(shí)，通過抗原可實(shí)現(xiàn)溶解劑的制備。在對食品中的病原微生物進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，強(qiáng)化ELISA檢測程序，可提高吸附的靈敏性。單核細(xì)胞的檢驗(yàn)，可采用細(xì)菌分離的方式，但檢驗(yàn)周期較長，所以，可建立重組單細(xì)胞ELISA檢測方法，提升單細(xì)胞細(xì)菌的檢驗(yàn)效果[4]。

　　3.2生物毒素檢驗(yàn)

　　真菌毒素對人體健康產(chǎn)生直接的影響，毒性相對較強(qiáng)，有致癌作用，如黃曲霉毒素的毒性較強(qiáng)，對人體的傷害性較大，具有一定的免疫抑制性，較低的含量就會(huì)導(dǎo)致各類疾病?？衫肊LISA對真菌毒素進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，如在利用ELISA檢驗(yàn)黃曲霉毒素B+G標(biāo)準(zhǔn)品的過程中，檢驗(yàn)的最低濃度為0.13ng/mL，最低的檢出量為50μg/kg，利用校正曲線分析，線性范圍為0.25～20ng/mL。可通過ELISA檢驗(yàn)，對生物毒素含量及吸附敏感性等方面進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，從而滿足食品安全檢驗(yàn)的實(shí)際需求。ELISA對真菌毒素的檢驗(yàn)與分析，包括黃曲霉素、抗原體及特異性抗體等方面，ELISA的應(yīng)用穩(wěn)定性較高，測量結(jié)果較準(zhǔn)確。

　　3.3藥物材料檢測

　　利用ELISA可對食品中的藥物殘留進(jìn)行檢測與分析，如有害殘留成分、禁用獸用殘留成分等。以肉制品為研究對象，利用ELISA可對生鮮肉的血清蛋白和熟食肉制品的肌肉抗原進(jìn)行檢測。在檢測瘦肉精時(shí)，可對食品的可食用性、安全性等進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，如果食用的肉制品瘦肉精含量超標(biāo)，易導(dǎo)致人們出現(xiàn)頭疼、四肢麻木等癥狀。而且，ELISA可對動(dòng)物脂肪中的孕激素殘留量進(jìn)行檢驗(yàn)，如果殘留量超標(biāo)，則說明食品質(zhì)量不達(dá)標(biāo)[5]。

　　3.4轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)測

　　在對轉(zhuǎn)基因食品的研發(fā)、食用等方面進(jìn)行綜合分析時(shí)，可通過ELISA技術(shù)對基因序列、目的蛋白質(zhì)等進(jìn)行檢驗(yàn)與分析，通過雙夾心ELISA法的應(yīng)用，可對轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行評估與分析，有助于提高食品安全質(zhì)量。以轉(zhuǎn)基因大豆為例，通過ELISA的應(yīng)用，可對抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆中的CP4EPSPS蛋白進(jìn)行檢驗(yàn)，而且，在檢驗(yàn)的過程中，可檢測出不同轉(zhuǎn)基因大豆中的蛋白含量，這對提高轉(zhuǎn)基因食品安全檢驗(yàn)水平有積極作用。

　　4結(jié)語

　　綜上所述，探究酶聯(lián)免疫吸附分析法的實(shí)際應(yīng)用，對酶聯(lián)免疫吸附在轉(zhuǎn)基因食品、藥物材料、生物毒素等檢測中的應(yīng)用進(jìn)行研究，酶聯(lián)免疫吸附的應(yīng)用方式不同，食品檢驗(yàn)與分析效果方面也存在一定的差異。但是，在酶聯(lián)免疫吸附的實(shí)際應(yīng)用中，強(qiáng)化自動(dòng)檢測儀器的開發(fā)與應(yīng)用對提高酶聯(lián)免疫吸附分析法在食品安全檢測中的實(shí)際應(yīng)用效果有積極作用。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1]李珍妮,曾文祥.酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究[J].現(xiàn)代食品,2020(22):190-191.

　　[2]姚利偉,周明潔.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品檢測中的應(yīng)用探析[J].現(xiàn)代食品,2020(17):192-194.

　　[3]邢瑋瑋.酶聯(lián)免疫吸附法在食品安全檢測中的應(yīng)用綜述[J].柳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào),2018,18(1):121-125.

　　[4]張亞東.酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)分析及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[J].科技致富向?qū)?2014(26):76.

　　[5]林偉琦.食品安全快速檢測技術(shù)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2020(3):307-313.

　　馬杰華

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