兒童EB病毒感染不同臨床疾病類型免疫功能研究

　　摘要：目的了解EB病毒（EBV）感染患兒不同臨床疾病類型與其免疫功能的關(guān)系。方法收集2010年10月至2012年4月湖南省兒童醫(yī)院內(nèi)科收治的111例EBV感染患兒，按臨床疾病類型分為４組：普通傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）組47例；重癥IM組35例；慢性活動性EBV感染（CAEBV）組10例；EBV相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增多癥（EBV-HLH）組19例。同時選擇正常兒童32例作為對照組。采用散射比濁法檢測血清免疫球蛋白和補(bǔ)體，采用流式細(xì)胞儀檢測法檢測外周血外周血淋巴細(xì)胞分化抗原CD4、CD8、CD4/CD8、CD16+56（NK）表達(dá)率。結(jié)果（1）CAEBV組、EBV-HLH組的C3、C4水平明顯低于其余３組，且后者與其余３組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CAEBV組IgE水平高于其余4組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；EBV-HLH組IgA、IgG水平顯著低于其余4組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（2）普通IM組及重癥IM組CD8+比值較其他3組顯著升高（P＜0.01）；EBV-HLH組的總T細(xì)胞、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK及B細(xì)胞均顯著下降，差異與其余4組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CAEBV組CD4+/CD8+較其余3組EBV感染患兒升高，與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，B細(xì)胞較普通IM組及重癥IM組、對照組降低（P＜0.05）。結(jié)論兒童EBV感染不同疾病類型與機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān)，EBV引起的嚴(yán)重器官功能損傷與機(jī)體免疫失衡有關(guān)，可能尤其與CD4+及B細(xì)胞降低顯著相關(guān)。體液免疫降低的程度可能會提示疾病預(yù)后。

　　關(guān)鍵詞：EB病毒；細(xì)胞免疫；體液免疫；兒童

　　EB病毒（Epstain-BarrVirus，EBV）感染的臨床表現(xiàn)及轉(zhuǎn)歸與EBV-DNA病毒量及機(jī)體免疫功能有關(guān)。有文獻(xiàn)報道，血漿或血清中的游離EBV-DNA與器官損害程度、疾病種類、疾病嚴(yán)重度及病死率呈正相關(guān)［3-4］，機(jī)體細(xì)胞免疫功能變化可提示疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。本文對EBV感染患兒不同臨床疾病類型及其免疫功能的關(guān)系進(jìn)行了研究，現(xiàn)報告如下。

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　　1資料與方法

　　1.1臨床資料

　　病例來自2010年10月至2012年4月湖南省兒童醫(yī)院內(nèi)科收治的111例EBV感染患兒，其中男62例，女49例。年齡8個月至15歲，中位年齡4.03歲。根據(jù)EBV感染的不同臨床類型將111例患兒分為以下4組：普通傳染性單核細(xì)胞增多癥（IM）組47例；重癥IM組35例；慢性活動性EBV感染（CAEBV）組10例；EBV相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增多癥（EBV-HLH）組19例。另選擇同期在湖南省兒童醫(yī)院兒?？企w檢的32例正常兒童為對照組，其中男21例，女11例；年齡2～14歲。這５組患兒的性別、年齡等臨床資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。

　　1.2方法

　　1.2.1分組

　　采用前瞻性臨床病例研究方法，對入選EBV感染患兒均于入院3d內(nèi)抽取EBV抗體，進(jìn)行肝腎功能、心肌酶、免疫全套（血清免疫球蛋白和補(bǔ)體）、淋巴細(xì)胞免疫功能、EBV-DNA定量等項檢查；對入選的正常兒童，均在征得其家長同意后進(jìn)行血清免疫球蛋白和補(bǔ)體及淋巴細(xì)胞免疫功能檢查。

　　1.2.2指標(biāo)測定

　　采用德國PARTEC流式細(xì)胞儀和全自動蛋白分析儀。外周血T、B細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測采用流式細(xì)胞儀檢測法，檢測方法：取外周靜脈血1mLEDTA-K2抗凝，在每支試管中加入10μL的四標(biāo)記單克隆抗體CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC和CD3-FITC／CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC，再加入100μL抗凝靜脈血充分混勻，共標(biāo)記30min，加固定劑30μL固定5min后，加入紅細(xì)胞溶解液1mL充分溶解紅細(xì)胞10～20min，加PBS緩沖液補(bǔ)充，用流式細(xì)胞儀計數(shù)10000～15000個淋巴細(xì)胞。血清免疫球蛋白和補(bǔ)體測定采用散射比濁法。免疫球蛋白測定試劑盒購自西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品（上海）有限公司，MultiTESTCD3-FITC／CD16+CD56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC和CD3-FITC／CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC購自美國DB公司。

　　2結(jié)果

　　2.1血清免疫球蛋白和補(bǔ)體檢測結(jié)果的比較CAEBV組、EBV-HLH組C3、C4水平低于其余３組，且C4與其余３組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CAEBV組IgE水平高于其余4組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；EBV-HLH組IgA、IgG水平顯著低于其余４組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

　　2.2外周血T、B細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測結(jié)果的比較普通IM組及重癥IM組CD8+比值較其他3組顯著升高（P＜0.01）；EBV-HLH組總T細(xì)胞，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、NK及B細(xì)胞均顯著下降，差異與其余4組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；CAEBV組CD4+輕度升高，但無統(tǒng)計學(xué)意義，CD4+/CD8+較其余EBV患兒升高，與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；B細(xì)胞較IM患兒及對照組明顯降低（P＜0.05）。見表2。

　　3討論

　　EB病毒（Epstain-Barrvirus，EBV）是一種雙鏈DNA病毒，屬于皰疹病毒科，亞科，人感染EBV后建立終身潛伏感染，人群感染率超過90％。EBV是一種重要的腫瘤相關(guān)病毒，與鼻咽癌、淋巴瘤等多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［1］。

　　在兒童，非腫瘤性EBV感染疾病主要包括傳染性單核細(xì)胞增多癥（infectiousmononucleosis，IM）、慢性活動性EBV感染（chronicactiveEpstein-Barrvirusinfection，CAEBV）及EBV相關(guān)噬血淋巴組織細(xì)胞增生癥（Epstein-Barrvirus-re?latedhemophagocyticlymphohistiocytosissyndrome，EBV-HLH）［2］，后兩種疾病是較為嚴(yán)重的EBV感染相關(guān)疾··465病，預(yù)后不良。

　　EBV主要通過唾液傳播，也可經(jīng)輸血傳染。原發(fā)EBV感染時，EBV首先在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，然后感染附近的B淋巴細(xì)胞，受到感染的B淋巴細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)可以造成全身性感染。外周血單個核細(xì)胞（PBMC）被用來檢測EBV載量，PBMC中EBV-DNA水平有助于CAEBV的診斷，EBV-DNA水平與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后有關(guān)。

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　　張慧a，李雙杰a，袁遠(yuǎn)宏b，康楨a，唐蓮a，譚艷芳a

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